脑膜转移更常见于EGFR突变阳性的非小细胞肺癌患者^[1], 而其诊断依赖于头颅MRI或脑脊液找肿瘤细胞, 但这两种方法均存在不足, 且对进一步深入研究脑膜转移的耐药机理极其困难, 为此广东省肺癌研究所吴一龙教授团队通过Cellsearch技术捕获脑脊液循环肿瘤细胞（cerebrospinal fluid circulating tumor cells, CSFCTCs）以进一步探索其发生发展机制。

该研究对高度怀疑脑膜转移的患者行MRI、腰椎穿刺取脑脊液和外周血肿瘤细胞检查, 脑脊液行液基薄层细胞学检测（thin-layer cytologital test, TCT）和Cellsearch捕获CSFCTCs, 并对CSFCTCs行二代测序（416个癌症相关的基因）, 结合临床资料分析Cellsearch捕获CSFCTCs在脑膜转移中的作用。结果显示, 21例患者被诊断为有脑膜转移, 其中20名患者通过Cellsearch脑脊液捕获到循环肿瘤细胞。CSFCTCs诊断脑膜转移的敏感性为95.2%, 高于循环肿瘤细胞（57.1%）、MRI（47.6%）和MRI + TCT（90.5%）。共14名患者行外周血捕获循环肿瘤细胞检测 , 仅5名患者检测到循环肿瘤细胞, 检出率比CSFCTCs低。

该项成果于2017-06-12在线发表在《Clin Cancer Res》上^[2], 提示Cellsearch捕获CSFCTCs诊断肺癌脑膜转移的敏感性远优于传统方法; 同一患者的CSFCTCs高于外周血循环肿瘤细胞, 提示前者可能更能代表颅内的肿瘤负荷状态。首次对CSFCTCs进行二代测序, 证实CSFCTCs的基因状态与原发灶高度一致, 提示CSFCTCs可作为“ 液体活检” 的一种方式来反映颅内转移特别是脑膜转移的耐药机制。EGFR T790M在CSFCTCs的检出率远低于颅外病灶, 提示可能存在其他的耐药机制, 如在CSFCTCs中检测到其他的潜在耐药基因, 包括MET扩增、MET突变、ERBB2突变, 其功能需要进一步验证。

Cellsearch通过EpCAM抗体可识别CSFCTCs上的EpCAM抗原, 提高了敏感性; 且Cellsearch系统采用的是半自动的诊断方法（CK⁺/DAPI⁺/CD45^-）, 而传统的脑脊液找肿瘤细胞更多地依赖于病理医师的经验。随着靶向药物的广泛应用, 晚期非小细胞肺癌患者的生存期已显著延长, 而脑膜转移患者的预后仍不理想, 早期识别并诊断, 有助于早期干预, 而CSFCTCs在此期间发挥了重要作用。

精准治疗时代, 非小细胞肺癌患者再活检对靶向治疗是极其重要的, 特别是肺部靶病灶稳定而出现颅内进展的患者, 脑脊液活检发挥了重要作用。EGFR T790M 是第一代TKI的最常见耐药突变, 然而在本研究中, 9例患者中的7例在颅外病灶检测到EGFR基因常见耐药突变EGFR T790M, 而在CSFCTCs中, 14例患者检测EGFR常见突变, 仅1例患者检测到EGFR T790M, 这与既往小样本研究中EGFR T790M在中枢神经系统病灶或脑脊液cfDNA比颅外病灶更少见是一致的^{[3, 4, 5, 6, 7]}。这可能与颅内EGFR-TKI低及T790M的空间异质性相关^{[7, 8, 9, 10]}, T790M阴性的肿瘤细胞可出现更强的侵袭性及发生远处转移^{[6, 11]}, 提示脑膜转移有可能存在其他发生机制, 需要更多研究证实。此外, Cellsearch通过EpCAM抗体可识别CSFCTCs上的EpCAM抗原而识别并分离CSFCTCs, 肺癌患者的EpCAM变换多样, 本研究中对这些CSFCTCs进行二代测序, 有可能会漏掉一些EpCAM阴性的肿瘤细胞, 而这些EpCAM阴性细胞有可能携带其他耐药或驱动基因, 这需要更多的研究进一步验证。

总的来说, Cellsearch捕获CSFCTCs诊断肺癌脑膜转移远优于传统方法。本研究首次对CSFCTCs进行二代测序, 证实CSFCTCs的基因状态与原发灶高度一致, 提示CSFCTCs可能是脑膜转移液体活检的重要方式。