引用本文
于菲, 陈娟, 孙娟, 侯玮. 非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA LINC02163的表达及临床意义. 循证医学, 2021,21(6): 346-350.
YU Fei, CHEN Juan, SUN Juan, HOU Wei. Expression and Clinical Significance of Long Non-Coding RNA LINC02163 in Non-Small Cell Lung Cancer. Journal of Evidence-Based Medicine,2021,21(6): 346-350.  
DOI:10.12019/j.issn.1671-5144.2021.06.007
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非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA LINC02163的表达及临床意义
于菲, 陈娟, 孙娟, 侯玮
陕西省核工业二一五医院呼吸内科, 陕西咸阳 712000
通讯作者: 陈娟, Tel：029-32088278, E-mail：caihairong234@163.com。
作者简介:

于菲（1987-）,女,陕西蓝田人,医学学士,主治医师,研究方向为呼吸内科疾病的诊治。

摘要

目的 探讨长链非编码RNA（long chain non-coding RNA,lncRNA）LINC02163在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及临床意义。方法 收集80例NSCLC患者术后癌组织及癌旁组织作为样本,应用qRT-PCR法分别检测组织样本中lncRNA LINC02163的表达量,并分析其与患者临床特征的关系,应用受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析lncRNA LINC02163诊断NSCLC的临床价值。结果 NSCLC组织中lncRNA LINC02163的相对表达量为（1.27±0.14）,明显高于癌旁组织（0.19±0.02）（ P<0.001）;TNM分期越高、出现淋巴结转移的NSCLC患者组织中lncRNA LINC02163的表达显著升高（ P<0.001）;lncRNA LINC02163预测诊断NSCLC的曲线下面积（area under the curve,AUC）为0.857（95%可信区间0.829~1.894）,约登指数为0.762,诊断敏感性为94.15%,特异性为87.62%。结论 NSCLC组织中lncRNA LINC02163呈高表达,其表达水平可能与NSCLC的发生进展有关。

关键词: LINC02163; 长链非编码RNA; 非小细胞肺癌; 表达
中图分类号:R734.2 文献标识码:A 收稿日期: 2021-04-26
Expression and Clinical Significance of Long Non-Coding RNA LINC02163 in Non-Small Cell Lung Cancer
YU Fei, CHEN Juan, SUN Juan, HOU Wei
Department of Respiratory Medicine, 215 Hospital of Shaanxi Nuclear Industry, Shaanxi Xianyang 712000, China
Abstract

Objective To explore the expression and clinical significance of long chain non-coding RNA （lncRNA） LINC02163 in non-small cell lung cancer （NSCLC） tissues.Methods Collect 80 cases of NSCLC patients with postoperative cancer tissues and adjacent tissues as samples. qRT-PCR was used to detect the expression of lncRNA LINC02163 in the tissue samples, and analyze the relationship between the expression of lncRNA LINC02163 and the clinical characteristics of patients. The receiver operating characteristic （ROC） curve was used to analyze the clinical value of lncRNA LINC02163 in the diagnosis of NSCLC.Results The relative expression of lncRNA LINC02163 in NSCLC tissue was （1.27±0.14）, which was significantly higher than that in adjacent tissues （0.19±0.02） （ P<0.001）. The higher the TNM stage, the higher the expression of lncRNA LINC02163 in the tissues of NSCLC patients with lymph node metastasis（ P<0.001）. The area under the curve （AUC） of lncRNA LINC02163 in the diagnosis of NSCLC was 0.857 [95%confidence interval （CI） 0.829~1.894], and the Youden index was 0.762, and the diagnostic sensitivity was 94.15%, and the specificity was 87.62%.Conclusions In NSCLC tissue, lncRNA LINC02163 was highly expressed, and its expression level may be related to the occurrence and progression of non-small cell lung cancer.

Key words: LINC02163; long non-coding RNA; non-small cell lung cancer; expression

临床研究表明, 多种长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）组织中表达异常[1]。lncRNA为不编码蛋白质RNA且长度超200核苷酸, 可在多个层面上调控基因表达, 其主要是通过影响肿瘤细胞的迁移、增殖等方面参与肿瘤发生进展[2]。LINC02163位于人类染色体5q21.2区域, 是新发现的基因间lncRNA分子[3]。有研究显示, lncRNA LINC02163与大肠癌[4]、结直肠癌[5]等恶性肿瘤有关, 但目前临床对于lncRNA LINC02163与NSCLC的关系研究报道较少, 因此, 为进一步探究lncRNA LINC02163在NSCLC组织中的表达, 本文对近两年收治的80例NSCLC患者进行研究, 现报道如下。

1 资料与方法
1.1 一般资料

选取2018年7月至2020年7月陕西省核工业二一五医院收治的80例NSCLC患者纳入研究, 入组患者均符合《中国原发性肺癌诊疗规范》[6]规定的相关诊断标准, 且均经手术病理证实为原发性NSCLC, 且入组前均未接受任何放化疗等治疗, 其中, 女性34例, 男性46例; 年龄43~75岁, 中位年龄60岁。收集术后癌组织及癌旁组织作为检测样本, 癌旁组织经病理证实为正常肺组织。将采集的新鲜组织样本经液氮冷冻处理后, 置于-80℃冰箱待检。

1.2 方法

1.2.1 总RNA提取方法

按照Trizol试剂盒（由Invitrogen公司提供, 货号：15596018, 批号：180629）说明书操作。取5 mm3样本超声匀浆, DEPC水溶解, 检测RNA纯度及浓度, 另取1 μ L RNA检测其完整性。

1.2.2 逆转录反应

按照逆转录试剂盒（由Invitrogen公司提供, 货号：4366597, 批号：180530）说明书操作, 反应体系20 μ L：RNA样品2 μ L、引物1 μ L、GAPDH反向引物1 μ L、逆转录酶1 μ L、5× RT缓冲液4 μ L、dNTP混合物（10 mM）1 μ L、RNase抑制剂0.5 μ L及不含RNase的H2O 9.5 μ L。反应条件：35℃ 45 s, 37℃ 15 min, 90℃ 30s, 4℃ 1 min, 产物保存于-20℃冰箱。

1.2.3 实时定量聚合酶链反应

按照试剂盒（由Invitrogen公司提供, 货号：F416S, 批号：180601）说明书操作, 反应体系25 μ L：稀释的cDNA 2 μ L、引物2 μ L、2× SYBR Premix Ex Taq 12.5 μ L、ddH2O 8.5 μ L。反应条件：75℃ 20 s, 95℃ 30 s, 45℃ 1 min, 72℃ 1 min, 35个循环。根据Genebank数据库, 选取β -ACTIN为内参, 引物委托上海生工生物工程公司合成, 见表1。

表1 引物序列表 Tab.1 Primer sequence of β -actin and lncRNA LINC02163

1.2.4 结果计算

采用2-Δ Δ CT方法[8]计算lncRNA LINC02163的表达水平, 每组取三个复孔均值, lncRNA LINC02163的相对表达量=2-Δ Δ Ct值（lncRNA LINC02163）-2-Δ Δ Ct值（β -actin）计算。

1.3 统计学分析

采用SPSS 21.0软件统计分析, 计量资料以“ x ± s” 表示并用t检验, 应用ROC曲线分析lncRNA LINC02163诊断NSCLC的临床价值, P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 lncRNA LINC02163的表达量分析

NSCLC组织中lncRNA LINC02163的相对表达量为（1.27± 0.14）, 明显高于癌旁组织（0.19± 0.02）（P< 0.001）, 见图1。

图1 组织中lncRNA LINC02163的表达
注：与癌旁组织比较, P< 0.001, n=80, 采用t检验Fig.1 The expression of lncRNA LINC02163 in tissues
Note： Compared with adjacent tissues, P< 0.001, n=80, using t test

2.2 lncRNA LINC02163的表达与患者临床特征的关系

TNM分期越高、出现淋巴结转移的NSCLC患者组织中lncRNA LINC02163的表达显著升高（P< 0.001）; 而不同性别、年龄、病理类型、组织分化程度的NSCLC患者组织中lncRNA LINC02163的表达无显著差异（P> 0.05）, 见表2。

表2 NSCLC组织中lncRNA LINC02163的表达与患者临床特征的关系 Tab.2 The relationship between the expression of lncRNA LINC02163 in NSCLC tissues and the clinical characteristics of patients
2.3 ROC曲线分析

由ROC曲线可知, lncRNA LINC02163预测诊断NSCLC的AUC为0.857[95%可信区间（confidence interval, CI）0.829~1.894], 约登指数为0.762, lncRNA LINC02163诊断NSCLC的敏感性为94.15%, 特异性为87.62%, 见图2。

图2 lncRNA LINC02163诊断NSCLC的ROC曲线Fig.2 ROC curve of lncRNA LINC02163 in the diagnosis of NSCLC

3 讨论

lncRNA具有丰富的生物学功能, 其普遍表达于真核细胞, 既往研究显示, ATB[7]、DANCR[9]、BC200[10]等多种lncRNA在NSCLC组织中表达异常, 提示lncRNA可能在NSCLC的发生进展过程中发挥作用。NSCLC为临床肺癌最常见类型, 其早期诊疗一直是临床关注的热点。lncRNA LINC02163为新近发现的lncRNA, 其在多种恶性肿瘤中表达异常[11], 因此, 我们猜想lncRNA LINC02163有可能成为恶性肿瘤诊疗的评价指标。

本研究通过对收集的NSCLC组织及癌旁组织样本应用qRT-PCR法检测发现, NSCLC组织中lncRNA LINC02163的相对表达量明显高于癌旁组织, 这说明lncRNA LINC02163在NSCLC组织中呈高表达, 其可能与NSCLC有关。罗毅等[12]学者对60例肝癌患者研究发现, 肝癌组织中lncRNA LINC02163表达上调, 其可能与肝癌的发生密切相关。另有学者研究发现, lncRNA LINC02163在结直肠癌组织中呈高表达[13]。由以上结果, 我们推测lncRNA LINC02163在多种恶性肿瘤组织中表达异常。

本研究显示, 不同TNM分期、不同淋巴结转移的NSCLC患者组织中lncRNA LINC02163的表达显著差异。结果提示, 高临床分期、出现淋巴结转移的NSCLC组织中lncRNA LINC02163表达量高, 其可能在NSCLC的发生进展中发挥促癌作用。既往学者研究报道, lncRNA LINC02163可通过调节microRNA-511-3p/ HMGA2轴来加速乳腺癌的恶性肿瘤行为, lncRNA LINC02163在乳腺癌组织中表达上调, 且其表达水平与淋巴结转移、TNM分期及肿瘤大小有关[14]。另有学者研究报道, 直肠癌组织中lncRNA LINC02163呈高表达, 且其与直肠癌的恶性程度有关[15]。因此, 我们推测下调lncRNA LINC02163的表达或将成为恶性肿瘤临床治疗的潜在靶点。

通过ROC曲线分析, 我们发现lncRNA LINC02163预测诊断NSCLC的AUC为0.857（95%CI 0.829~1.894）, 约登指数为0.762, 诊断敏感性为94.15%, 特异性为87.62%。结果提示, lncRNA LINC02163诊断NSCLC的敏感性、特异性均较高。因此, 我们推测lncRNA LINC02163的表达与NSCLC的恶性程度有关, 或将成为NSCLC的诊断标志物。Lemei[16]的研究报道, lncRNA LINC02163在胃癌组织中的表达水平升高, 其可作为胃癌诊断的生物标志物。我们推测lncRNA LINC02163可能与多种恶性肿瘤有关, 或将成为恶性肿瘤诊断的标志物。

综上所述, NSCLC组织中lncRNA LINC02163呈高表达, 其表达水平可能与NSCLC的发生进展有关, 可能成为NSCLC临床诊断标志物。

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